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細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)使用說(shuō)明

產(chǎn)品說(shuō)明：自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線(xiàn)粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng) 355nm。阻斷濾光片波長(zhǎng) 512nm。細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC 法)，適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，又稱(chēng)為 MDC 染色液，可與 EB 合用雙染。

操作步驟(僅供參考)：

(一)、MDC單獨(dú)染色：

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。

5、 室溫避光染色15～45min。

6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。

7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。

8、 熒光顯微鏡下觀(guān)察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

(二)、與EB雙染色：

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。

5、 滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。

6、 熒光顯微鏡下觀(guān)察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果：正常細(xì)胞 細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細(xì)胞 染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒。

注意事項(xiàng)：

1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。

2、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

3、 操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。