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鈣離子探針說明書

Fluo-3, AM
貨號:S21010
保存:-20℃干燥避光保存,有效期一年。
產(chǎn)品說明:
CAS:121714-22-5
中文名:鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名:1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2- amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
結(jié)構(gòu)式:
分子式:C51H50Cl2N2O23
分子量:1129.85
性質(zhì):
1. 外觀:紅色粉末
2. 純度:≥90% (HPLC)
3. 產(chǎn)品描述:
Fluo-3, AM是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3 ,從而被滯留在細胞內(nèi),F(xiàn)luo-3 若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的,但是當它與細胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強的熒光,大激發(fā)波長為506nm ,大發(fā)射波長為526nm 。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm 左右,發(fā)射波長為 525~530nm 。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
操作說明:(for Human T cells)
1,試劑
2 mM 的Fluo-3, AM/DMSO (將1mg Fluo-3, AM 溶于442μL DMSO )
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution(HBSS)
HEPES buffer saline(10mM HEPES,1mM Na2HPO4,137mM NaCl,5mM KCl, 1mM CaCl2, 0.5mM MgCl2,5mM Glucose,0.1% BSA,pH 7.4 )
2,操作
(1) 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127,Pluronic F127 可以防止Fluo-3, AM 在HBSS 中
聚合并能幫助其進入細胞。
(2) 用HBSS 稀釋Fluo-3, AM 溶液,制備4μM 的Fluo-3, AM 工作液。
(3) 將Fluo-3, AM 工作液加入細胞,在37℃培養(yǎng)20分鐘。
(4) 加入5 倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS,再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
(5) 用HEPES buffer saline洗滌細胞 3 次,然后用HEPES buffer saline使細胞重懸浮,制成1×105 cells/mL 的溶液。
(6) 37 ℃下培養(yǎng)10分鐘,然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長506nm,發(fā)射波長526nm 。

注意:標記的條件因細胞種類而異,在每次實驗前,請先確定佳條件。以上方法僅供參考。

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